纤维素酶活力的测定原理
纤维素酶是水解纤维素生产葡萄糖及纤维二糖的一类酶的总称。包括C1酶、CX酶及纤维二糖酶。C1酶使天然纤维素晶体分链,成为直链纤维素。CX酶不能水解天然纤维素,但能分解直链纤维素β-1,4糖苷键生成纤维二糖。纤维二糖经过纤维二糖酶作用生成葡萄糖。测定葡萄糖的方法很多,比较简单的方法可以采用3,5-二硝基水杨酸法(简称DNS法)。3,5-H硝基水杨酸是一种氧化剂,能与还原糖作用,使硝基还原成氨基,溶液变为橙色。在一定的还原糖浓度范围内,橙色的深度与还原糖的浓度成正比,据此可以推算出纤维素酶的活力。但是不同来源的纤维素酶对不同的天然纤维素的分解能力也不同,即使是同一种酶,对不同的天然纤维素的分解能力也不同。为了统一标准,目前通常以羧甲基纤维素钠盐(简称CMC)作为纤维素酶作用的底物。但需要指出的是CMC无论在结构上还是在性质上都不同于天然纤维素,天然纤维素不溶于水,而CMC有很强的亲水性,非常容易被纤维素酶分解。在相同条件下,同一种纤维素酶分解CMC所产生的还原糖远大于水解天然纤维素所产生的还原糖。因此CMC酶活力只能代表CX酶的活力,而且它的数值总是比较高的,只能供作参考。
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